(NB) Coliforms là số đông trực khuẩn gram âm ko sinh bào tử, hiếu khí hoặc kỵ khí tùy ý, có công dụng lên men lactose sinch acid và sinh tương đối ngơi nghỉ 370C vào 24 – 48 tiếng. Coliforms được xem như là đội vi sinh đồ vật chỉ thị: số lượng hiện hữu của bọn chúng vào thực phđộ ẩm, nước giỏi những một số loại mẫu môi trường được dùng để chỉ thị khả năng hiện nay diện của các loại vi sinc thiết bị khác.




Bạn đang xem: Thực hành phân tích vi sinh thực phẩm





Xem thêm: Thế Giới Football League - Download Tải Game Bóng Đá Miễn Phí

vi trùng hiếu khítổng nấm menCông nghiệp thực phẩmkhuẩn lạcđịnh lượng Bacillus cereusso sánh vi sinh vật


Xem thêm: Sửa Lỗi Khi Ghép Xe Ngang Oto Vào Nơi Đỗ(Thực Hành+Lý Thuyết) 2021

Trường Đại học Công nghiệp thực phđộ ẩm TP.Hồ Chí Minh 2010 THỰC HÀNH PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ThS. Lê Thùy Linch 0 Lưu hành nội cỗ Trường Đại học tập Công nghiệp thực phđộ ẩm Thành Phố Hồ Chí Minh NỘI DUNG Trang Bài 1: Định lượng Coliforms cùng E. coli 2 1.1. Tóm tắt kỹ năng và kiến thức cơ bản 2 1.2. Quy trình định lượng Coliforms với E. coli bằng phương pháp MPN 3 1.3. Cách thực hiện xem sét 4 1.4. Cách tính công dụng 10 Bài 2. Định lượng Staphylococcus aureus 10 2.1. Tóm tắt kỹ năng cơ phiên bản 10 2.2. Quy trình định lượng Staphylococcus aureus bởi phương pháp MPN 10 2.3. Cách triển khai cùng phương pháp tính kết quả 11 Bài 3. Định tính Salmonella 14 3.1. Tóm tắt kỹ năng và kiến thức cơ phiên bản 14 3.2. Qui trình định tính Salmonella trong thực phđộ ẩm 14 Bài 4. Định lượng Bacillus cereus 20 4.1. Tóm tắt kiến thức cơ bạn dạng 20 4.2. Quy trình định lượng Bacillus cereus bằng phương thức đếm khuẩn lạc trăng tròn Bài 5. Định lượng tổng vi trùng hiếu khí cùng tổng nấm men-nnóng mốc 24 5.1. Tóm tắt kiến thức và kỹ năng cơ bản 24 5.2. Quy trình so sánh 26 Tài liệu xem thêm 1. Trần Linch Thước, Phương pháp đối chiếu vi sinc trang bị nội địa, thực phđộ ẩm cùng mĩ phẩm, NXB giáo dục và đào tạo, 2006 2. http://www.microbelibrary.org 3. http://www.chromagar.com 4. http://www.rapidmicrobiology.com 5. http://www.marietta.edu Biên soạn: Lê Thùy Linh Page | 1 Homepage: http://lethuylinch.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phđộ ẩm Thành Phố Hồ Chí Minh Bài 1: Định lượng Coliforms và E. coli 1.1 Tóm tắt kiến thức và kỹ năng cơ bản Hình 1: phạt hiện Coliforms và E. coli vào thực phẩm hay nước bằng 1.1.1 Định nghĩa môi trường CHROMagar ECC Coliforms là những trực trùng gram âm ko sinch bào tử, hiếu khí hoặc kỵ khí tùy ý, có chức năng lên men lactose sinh acid với sinc khá ở 370C trong 24 – 48 tiếng. Coliforms được coi là đội vi sinc vật dụng chỉ thị: số lượng hiện hữu của chúng trong thực phđộ ẩm, nước tuyệt những các loại chủng loại môi trường xung quanh được dùng để thông tư kỹ năng hiện hữu của những các loại vi sinch thứ không giống. Nhóm Coliforms bao gồm 4 tương tự là: E. coli, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter. Tính chất sinch hóa đặc thù của nhóm này được biểu lộ qua các thí điểm Indol (I), Methyl Red (MR), Voges-Proskauer (VP) cùng Citrate (iC) hay được Gọi là IMViC. Coliforms chịu nóng là những Coliforms có khả năng lên men lactose sinc hơi trong vòng 24h lúc ủ ở 440C trong môi trường canh EC. Coliforms phân (Faecal Coliforms) là Coliforms chịu nhiệt có công dụng sinc indole Khi ủ khoảng tầm 24h làm việc 440C trong canh Trypton. E. coli là Coliforms phân đến tác dụng xem sét IMViC là ++-- (Indol +, Methyl Red +, Voges-Proskauer -, Citrate -) 1.1.2 Phương thơm pháp Most Probable Number (MPN) Đây là phương thức định lượng dựa trên công dụng định tính của một loạt thí điểm được tái diễn làm việc một số độ trộn loãng khác biệt. Thông thường, bài toán định lượng này được tiến hành tái diễn 3 lần ở 3 độ trộn loãng bậc 10 thường xuyên, tổng cộng 3 x 3 = 9 ống thử. Quy trình tiến hành như sau: Pha loãng chủng loại phân tích sinh hoạt 3 mật độ trộn loãng bậc 10 tiếp tục. Ủ ở ánh nắng mặt trời với thời hạn tương thích Kết trái biểu loài kiến chứng tỏ sự tăng trưởng của vi sinh vật dụng đề xuất kiểm định Ghi dìm số lượng ống thử dương tính ngơi nghỉ từng độ pha loãng. Tra bảng Mac Crady Mật độ vi sinh trang bị MPN/100 ml xuất xắc MPN/1g mẫu Biên soạn: Lê Thùy Linch Page | 2 Homepage: http://lethuylinc.weebly.com Trường Đại học Công nghiệp thực phẩm TP..Hồ Chí Minh Crúc ý: Đa số những bảng MPN hỗ trợ số liệu sống dạng số MPN trong 100ml dung dịch được sử dụng nhằm so với sinh hoạt những liều lượng là 10ml, 1ml, 0.1 ml. Trên thực tế phân tích, fan ta hay được sử dụng 1ml cho chủng loại đã trộn loãng 10-1, 10-2, 10-3. Lượng mẫu mã cùng với những độ trộn loãng này tương đương cùng với 1/100 lượng chủng loại áp dụng theo bảng MPN/100ml tính theo lượng chủng loại là 10ml, 1ml, 0.1 ml nêu trên. Vậy số liệu của bảng MPN/100ml tính theo lượng mẫu là 10ml, 1ml, 0.1 ml tương tự với MPN/ml chủng loại chưa trộn loãng khi 1ml của những hỗn hợp tất cả độ pha loãng 10-1, 10-2, 10-3 được dùng để làm đối chiếu. Trường phù hợp tỷ lệ vi sinc đồ vật tương đối cao, rất cần phải áp dụng loạt nồng độ trộn loãng tiếp sau cần phải nhân trị số tra bảng MPN nêu trên cùng với thông số trộn loãng. Ví dụ: thực hiện 1ml cho mỗi độ trộn loãng 10-2, 10-3, 10-4 tức là chỉ thực hiện 1/10 lượng mẫu mã làm việc từng nồng độ đối với trường đúng theo dùng 1ml mẫu mã ở các độ pha loãng 10-1, 10-2, 10-3. Do vậy, trị số tra bảng MPN đề xuất nhân thêm thông số pha loãng là 10. 1.2 Quy trình định lượng Coliforms cùng E. coli bởi cách thức MPN Chuẩn bị dịch đồng điệu hoặc pha loãng mẫu mã để có độ pha loãng 10-1, 10-2, 10-3… Chuyển 1ml dung dịch 10-1, 10-2, 10-3 vào ống 10ml canh LSB, mỗi nồng độ bao gồm 3 ống lặp lại, ủ sinh hoạt 370C, 48 tiếng Ghi dìm các ống LSB (+) (sinch hơi) ở từng mật độ pha loãng Cấy vào ống canh BGBL, Cấy vào ống canh EC, ủ ủ nghỉ ngơi 370C ± 10C, 48 giờ đồng hồ làm việc 44.50C ± 0.20C, 24 giờ đồng hồ Số ống (+) làm việc mỗi độ pha loãng Số ống (+)(sinch hơi )sống mỗi độ pha loãng Cấy lên thạch EMB, ủ sinh hoạt 370C, 24 giờ Coliforms Xem trang sau Biên soạn: Lê Thùy Linch Page | 3 Homepage: http://lethuylinh.weebly.com Trường Đại học Công nghiệp thực phẩm TP HCM Tiếp theo Chọn trùng lạc (tròn, dẹt hình đĩa cùng có ánh kyên xanh), ghép vào Trypton, MR-VP.., SC Citrate, ủ làm việc 44.50C ± 0.20C, 24 giờ đồng hồ Thử nghiệm IMViC Đếm số ống canh EC (+) và IMViC ++--, tra bảng MPN E. coli 1.3 Cách thực hiện thử nghiệm Mẫu phân tích: nước mía nguyên hóa học (cần sử dụng 10ml cho một tổ) 1.3.1 Pha môi trường với tiệt trùng phép tắc Bước 1: trộn môi trường thiên nhiên Tên môi trường thiên nhiên Thành phần Tổng thể tích Ghi chú 500 ml nước Phân phối hận cho từng tổ 27ml NaCl : 42.5g SPW đựng SPW (9ml/ống nghiệm) (Saline Pepton Pepton: 5g trước lúc tiệt trùng. (buổi 1) Water) 1000 ml nước Phân pân hận 90ml LSB cho Tryptose: 20g LSB chứa mỗi tổ (10ml/ống nghiệm) (Lauryl Sulphate Lactose: 5g trước lúc vô trùng. (buổi 1) Broth) Sodium chloride: 5g pH 6.8 ± 0.2 KH2PO4: 2.75g K2HPO4: 2.75g Lauryl sulphate: 0.1g 1000 ml nước Phân păn năn 90ml BGBL mang lại Peptone: 10g BGBL Biên soạn: Lê Thùy Linch Page | 4 Homepage: http://lethuylinc.weebly.com Trường Đại học Công nghiệp thực phđộ ẩm Thành Phố Hồ Chí Minh chứa từng tổ (10ml/ ống thử có (Brilliant Green Lactose: 10g Lactose Mật bò: 20g chứa ống Durham) trước khi Bile pH 7.4 vô trùng. (buổi 1) Broth) Brilliant green: 0.0133g Trypticase or tryptose: 1000 ml nước Phân păn năn 90ml BGBL mang lại EC chứa mỗi tổ (10ml/ ống nghiệm tất cả (E.coli medium) 20g Muối mật No.3: 1.5g cất ống Durham) trước lúc pH 6.9 khử trùng. (buổi 1) Lactose: 5g KH2PO4: 1.5g K2HPO4: 4g NaCl: 5g Pancreatic digest of 1000 ml nước Phân pân hận 100ml EMB mang lại EMB chứa. mỗi tổ (20ml/petri) (buổi 2) (Eosin Methylene gelatin: 10g Blue Agar) Lactose: 10g pH 7.1 ± 0.2 K2HPO4: 2g Eosin Y: 0.4g Methylene blue: 65mg Agar: 15g hoặc 1000ml nước Mỗi tổ chỉ cần sử dụng 20ml, phân Tryptone Tryptone water chứa păn năn 10ml/ống thử. trypticase:10g (buổi 3) pH 7.2 ± 0.2 1000ml nước Mỗi tổ chỉ cần sử dụng 30ml, phân Both Môi ngôi trường 1: MR-VP Buffered peptone-water đựng. pân hận 10ml/ống thử. (Glucose Kiểm tra lại môi trường thiên nhiên cung Phosphate) powder: 7g pH 6.9 ± 0.2 cấp làm sao nhằm pha môi trường. Glucose: 5g (buổi 3) K2HPO4: 5g Môi ngôi trường 2: Casein Pancreatic Digest: 3.5g Peptic digest of animal tissue:3.5g Dextrose: 5g Potassium phosphate: 5g Biên soạn: Lê Thùy Linh Page | 5 Homepage: http://lethuylinch.weebly.com Trường Đại học Công nghiệp thực phẩm TPhường.Hồ Chí Minh pH 6.9 ± 0.2 Môi ngôi trường 3: Peptone: 5g Glucose: 5g Phosphate buffer: 5g pH 7.5 ± 0.2 1000ml nước Mỗi tổ chỉ dùng 50ml, phân Sodium citrate: 2g SCA chứa. Đun rét phối 10ml/ống nghiệm. (Simmons Citrate NaCl: 5g nhẹ và thỉnh (buổi 3) Agar) K2HPO4: 1g phảng phất lắc. NH4H2PO4: 1g Đun sôi 1-2 MgSO4: 0.2g blue: phút ít cho tới Bromothymol 0.08g Lúc kết hợp không còn. pH 6.8 ± Agar: 15g 0.2 Bước 2: vô trùng luật pháp và môi trường thiên nhiên vẫn pha. Bao gói quy định với phân phối môi trường xung quanh vào phép tắc, đính nút ít với bao gói. Hấp tiệt trùng ngơi nghỉ 1210C vào 15 phút. 1.3.2 Cách tiến hành: Cách 3: pha loãng chủng loại 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml ống 9ml chủng loại 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 Độ trộn loãng Hình 2: quá trình pha loãng chủng loại Pha loãng mẫu mã thành 3 độ đậm đặc trộn loãng 10-1, 10-2, 10-3. Biên soạn: Lê Thùy Linc Page | 6 Homepage: http://lethuylinh.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phđộ ẩm TP.Hồ Chí Minh Bước 4: Cấy chủng loại vào canh LSB Chuyển 1ml dung dịch 10-1, 10-2, 10-3 vào ống 10ml canh LSB, từng nồng độ tất cả 3 ống tái diễn, ủ sinh sống 370C, 48 giờ. Hình 3: Sơ vật cấy mẫu tự các độ trộn loãng 10-1 10-2 10-3 Bước 5: Định lượng Coliform với E. coli Định lượng Coliform Định lượng E. coli Ghi dấn số ống có sinch khá (+) Ghi nhận số ống tất cả sinch hơi (+) Dùng que ghép vòng cấy chuyển dịch chủng loại Dùng que cấy vòng cấy chuyển dời chủng loại tự những ống LSB (+) sang trọng các ống gồm đựng từ các ống LSB (+) thanh lịch môi trường xung quanh canh canh BGBL với ủ sinh sống 370C ± 10C, 48 giờ đồng hồ EC, ủ ngơi nghỉ 44.50C ± 0.20C, 24 tiếng Ghi dấn số ống gồm sinch khá (+) ứng với Ghi thừa nhận số ống gồm sinh khá (+) ứng cùng với mỗi độ trộn loãng mỗi độ trộn loãng Tính kết quả (coi 1.4) Dùng que ghép vòng ria dịch chủng loại từ những ống (+) bên trên canh EC lịch sự môi trường thạch đĩa EMB. Ủ ngơi nghỉ 370C, 24 giờ đồng hồ. Chọn trùng lạc 2 lần bán kính lớn hơn 1mm (tròn, dẹt hình đĩa với tất cả ánh kyên xanh) (xem hình 4), cấy vào Trypton, MR-VPhường, SC Citrate, ủ ngơi nghỉ 44.50C ± 0.20C, 24 tiếng Biên soạn: Lê Thùy Linh Page | 7 Homepage: http://lethuylinc.weebly.com Trường Đại học Công nghiệp thực phđộ ẩm TPhường.Hồ Chí Minh Hình 4: E.coli nuôi bên trên môi trường xung quanh thạch EMB cho trùng lạc màu klặng xanh (theo Naowarat Cheeptmê mẩn, Thompson Rivers University, Kamloops, BC, Canada) Cách 6: nghiên cứu IMViC Hình 5: Kết quả IMViC của Escherichia coli sau 24giờ ủ sống 37°C. (Anne Hanson, University of Maine, Orono) Ống A: dương tính xem sét indole trên môi trường thiên nhiên tryptone. Xuất hiện nay lớp red color trên bề mặt môi trường sau thời điểm nhỏ dại dung dịch demo Kovács. Ống B: dương tính thí nghiệm methyl red mở ra màu đỏ của methyl red. Ống C: âm tính thí nghiệm Voges-Proskauer biểu hiện qua sự ko biến hóa màu sắc sau thời điểm mang đến thuốc thử Barritt’s A và Barritt’s B. Ống D: âm thế thử nghiệm citrate biểu lộ qua sự biến đổi Color với không có trùng lạc vào ống nghiệm. a. Thử nghiệm Indol (I): Nguyên tắc: Tryptophan là 1 acid amin có thể bị lão hóa bởi vì một trong những vi sinch trang bị bao gồm hệ enzyme tryptophanase tạo cho các thành phầm cất cội indol. Việc phân phát hiện nay indol được tiến hành bằng phản ứng của phân tử này với những thuốc test chứa p- Dimethylaminbenzaldehyde (p-DMABA) khiến cho một phức hóa học dạng quinone tất cả màu đỏ. Phương pháp tiến hành: Môi trường sử dụng mang lại phân tách này là nước tryptone. Sinh kăn năn chủng thuần được cấy vào môi trường thiên nhiên lỏng tryptone, ủ sinh sống ánh nắng mặt trời 370C vào 24-48 giờ. Bổ sung 1ml ether hoặc xylene vào ống nghiệm, rung lắc hầu như nhằm tách Biên soạn: Lê Thùy Linch Page | 8 Homepage: http://lethuylinh.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phẩm TP..Hồ Chí Minh tách indol lên lớp dung môi hữu cơ. Nhỏ 5 giọt thuốc thử vào ống dịch nuôi ghép, nhằm yên vài ba phút, quan sát và theo dõi sự chế tác red color trong lớp dung môi cơ học. Đọc kết quả: (+) mở ra của lớp red color trên bề mặt môi trường thiên nhiên. (-) lớp màu sắc tiến thưởng của dung dịch test. Đôi khi bao gồm sự mở ra của màu sắc cam do skatol, là tiền hóa học của methyl hóa của indol, tạo thành. Hình 6: phân tách Indol b. Thử nghiệm Methyl Red (MR): Nguim tắc: thông tư đỏ methyl red góp tách biệt độ đậm đặc H+ hiện diện trong môi trường thiên nhiên sau thời điểm vi sinc đồ dùng lên men glucose. Chỉ thị này biến đổi màu sắc nlỗi sau: pH6.0 màu sắc vàng. Pmùi hương pháp tiến hành: Môi trường thực hiện cho thể nghiệm này là môi trường lỏng Glucose Phosphate (MR-VP Broth). Dùng que vòng cấy một lượng nhỏ tuổi trùng lạc trên môi trường thiên nhiên MR-VPhường, ủ nghỉ ngơi 370C trong tầm 2-5 ngày. Thêm vào vài giọt dung dịch demo đỏ methyl red (0.02% vào các thành phần hỗn hợp đụng nước tất cả Phần Trăm 3:2, bảo quản ngại sống 40C) vào vào ống thử dịch nuôi ghép, phát âm hiệu quả tức thì. Đọc kết quả: (+) môi trường thiên nhiên gồm màu đỏ sau khi bổ sung cập nhật thuốc thử. (-) Lúc có màu sắc xoàn. Trường đúng theo color cam, bắt buộc tiếp tục ủ ống môi trường có tương tự trong 4 ngày với tiến hành lại thí điểm. Hình 7: thể nghiệm MR c. Thử nghiệm Voges-Proskauer (VP) (coi mục 3.3, bài xích 3) d. Thử nghiệm Citrate (iC) Nguyên tắc: sự đổi thay dưỡng citrate vì vi sinc đồ sẽ tạo ra CO2 làm cho kềm hóa môi trường thiên nhiên. Mặt khác đông đảo VSV có chức năng sử dụng citrate có tác dụng mối cung cấp carbon độc nhất vô nhị phần đông có công dụng sử dụng muối bột ammonium có tác dụng mối cung cấp đạm độc nhất vô nhị. Sự phân giải của muối bột ammonium sử dụng làm cho nguồn đạm vào môi trường đang sinh NH3 làm cho kiềm hóa môi trường. Sự nâng cao giá trị pH này được thông tư bằng sự thay đổi màu của thông tư pH trong môi trường. Biên soạn: Lê Thùy Linh Page | 9 Homepage: http://lethuylinch.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phđộ ẩm TP..HCM Phương thơm pháp tiến hành: Môi trường sử dụng cho nghiên cứu này là môi trường lỏng SCA. Dùng que vòng cấy ria một lượng nhỏ khuẩn lạc lên môi trường xung quanh SCA rắn trong ống thử thạch nghiêng, ủ làm việc 350C trong tầm 24-48 tiếng. Đọc kết quả: (+) lúc xuất hiện khuẩn lạc với môi trường thiên nhiên đưa lịch sự màu xanh da trời dương. (-) Khi không có khuẩn lạc cùng môi trường không thay đổi blue color lục. 1.4 Cách tính hiệu quả Hình 8: phân tách Citrate Từ con số các ống thử bao gồm E. coli (+) ở từng độ pha loãng của chủng loại, dùng bảng MPN loạt 3 ống nghiệm sinh sống 3 mật độ pha loãng liên tục nhằm tính ra mật độ vi sinh vật dụng trong chủng loại và màn trình diễn bên dưới dạng trị số MPN/ml mẫu ban đầu chưa pha loãng. Bài 2. Định lượng Staphylococcus aureus 2.1. Tóm tắt kiến thức cơ bạn dạng Staphylococcus aureus là vi khuẩn hiếu khí xuất xắc kị khí tùy ý, hình cầu, gram dương, tất cả nghiên cứu coagulase, phản bội ứng DNAse, phosphatease (+) có chức năng lên men và sinch acid tự mannitol, trehachiến bại, sucrose. Tất cả các cái S. aureus hầu hết mẫn cảm với novobiocine, có công dụng vững mạnh trong môi trường đựng mang đến 15% NaCl. Một số chiếc có khả năng lớn mạnh làm cho Hình 9: S. aureus bên trên BPA rã ngày tiết trên môi trường thạch huyết. S. aureus hoàn toàn có thể lây lan vào thực phẩm qua con đường tiếp xúc với người thao tác làm việc trong quy trình chế biến thực phđộ ẩm. Sự hiện diện với mật độ cao của S. aureus trong thực phđộ ẩm chỉ thị điều kiện vệ sinh với kiểm soát và điều hành nhiệt độ kém của quy trình bào chế. 2.2 Quy trình định lượng Staphylococcus aureus bằng phương thức MPN Pmùi hương pháp này được dùng để làm định lượng S. aureus trong mẫu tất cả tỷ lệ S. aureus phải chăng dẫu vậy mật độ vi sinc trang bị đối đầu và cạnh tranh cao. Biên soạn: Lê Thùy Linch Page | 10 Homepage: http://lethuylinc.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phẩm Thành Phố Hồ Chí Minh Phương thơm pháp tiến hành: Môi ngôi trường thực hiện cho nghiên cứu này là môi trường thiên nhiên lỏng SCA. Dùng que vòng ghép ria một lượng nhỏ dại trùng lạc lên môi trường xung quanh SCA rắn trong ống thử thạch nghiêng, ủ nghỉ ngơi 350C trong khoảng 24-48 giờ. Đọc kết quả: (+) lúc xuất hiện trùng lạc và môi trường gửi sang trọng màu xanh lá cây dương. (-) lúc không có trùng lạc với môi trường thiên nhiên không thay đổi màu xanh da trời lục. 1.4 Cách tính công dụng Hình 8: thí điểm Citrate Từ con số những ống thử gồm E. coli (+) làm việc từng độ trộn loãng của chủng loại, cần sử dụng bảng MPN loạt 3 ống nghiệm sống 3 mật độ trộn loãng tiếp tục để tính ra tỷ lệ vi sinch đồ vật vào mẫu mã với màn trình diễn dưới dạng trị số MPN/ml chủng loại ban sơ không trộn loãng. Bài 2. Định lượng Staphylococcus aureus 2.1. Tóm tắt kiến thức cơ bản Staphylococcus aureus là vi trùng hiếu khí xuất xắc kị khí tùy ý, hình cầu, gram dương, gồm xem sét coagulase, làm phản ứng DNAse, phosphatease (+) có công dụng lên men cùng sinh acid tự mannitol, trehathua thảm, sucrose. Tất cả những loại S. aureus hồ hết mẫn cảm cùng với novobiocine, có chức năng tăng trưởng trong môi trường xung quanh đựng mang đến 15% NaCl. Một số dòng có tác dụng vững mạnh làm Hình 9: S. aureus trên BPA rã huyết bên trên môi trường thạch ngày tiết. S. aureus có thể lây nhiễm vào thực phđộ ẩm qua tuyến phố xúc tiếp với người làm việc trong quá trình chế biến thực phẩm. Sự hiện hữu với tỷ lệ cao của S. aureus trong thực phđộ ẩm thông tư ĐK lau chùi và vệ sinh cùng kiểm soát điều hành ánh nắng mặt trời kém của quy trình bào chế. 2.2 Quy trình định lượng Staphylococcus aureus bởi cách thức MPN Phương pháp này được dùng làm định lượng S. aureus trong mẫu mã bao gồm tỷ lệ S. aureus phải chăng nhưng lại tỷ lệ vi sinh đồ gia dụng đối đầu cao. Biên soạn: Lê Thùy Linch Page | 10 Homepage: http://lethuylinch.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phđộ ẩm Thành Phố Hồ Chí Minh Đồng độc nhất chủng loại và trộn loãng mẫu mã thành các hàng độ đậm đặc thập phân 10-1, 10-2, 10-3… Chuyển 1ml hỗn hợp 10-1, 10-2, 10-3 vào ống 10ml canh MSB, từng nồng độ gồm 3 ống tái diễn, ủ ở 370C, 48 giờ Chọn ống (+) đục ngơi nghỉ từng độ trộn loãng Ria ra đĩa thạch BPA, ủ làm việc 370C, 48 tiếng Chọn khuẩn lạc đặc thù (tròn lồi, black láng, tất cả quầng trong và quầng sáng bao quanh (nhiều lúc chỉ xuất hiện thêm 1 vào 2 quầng)) Cấy vào TSA, ủ làm việc 370C ± 10C , 24 giờ đồng hồ Thử nghiệm dừng kết coagulase Ghi thừa nhận số coagulase (+) ở từng độ trộn loãng Tra bảng MPN Mật độ S.aureus (MPN/g hoặc MPN/ml) 2.3 Cách thực hiện và tính hiệu quả Mẫu phân tích: thịt con lợn sinh sống, trọng lượng 50g cho 1 lớp Biên soạn: Lê Thùy Linch Page | 11 Homepage: http://lethuylinch.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phđộ ẩm TP..HCM Cách 1: trộn môi trường thiên nhiên Tên môi trường Thành phần Tổng thể tích Ghi chụ 500 ml nước Phân păn năn cho mỗi tổ 27ml NaCl : 42.5g SPW chứa SPW (9ml/ống nghiệm) (Saline Pepton Pepton: 5g trước lúc tiệt trùng. (buổi 2) Water) Cao thịt: 1g 1000 ml nước Phân păn năn 90ml MSB mang đến MSB (Mannitol Salternative text Polypeptone: 10g đựng mỗi tổ (10ml/ống nghiệm) Broth) trước lúc vô trùng. (buổi 2) NaCl: 75g pH 7.4 ± 0.2 Mannitol: 10g Phenol red: 0.025g 1000 ml nước Phân păn năn 100ml BPA mang lại Môi trường cơ bản BPA chứa mang lại môi từng tổ (20ml/petri) (buổi 2) (Baird Parker Tryptone:10g Cao thịt: 5g ngôi trường cơ bạn dạng Agar) Cao nấm men: 1g pH 7.0 ± 0.2 Sodium pyruvate: 10g Glycine: 12g Lithium chloride.6H2O: 5g Agar: 20g Môi ngôi trường hoàn chỉnh 5ml Bacto EY tellurite (45-500C) enrichment vào 95ml môi trường xung quanh cơ bạn dạng được thiết kế nóng rã. Môi trường hoàn chỉnh phải đục. 1000 ml nước Phân phối 50ml BGBL mang đến Trypticase peptone: 15g TSA cất từng tổ (25ml/petri) (buổi 3) (Tryptone Soya Phytone peptone: 5g Agar) NaCl: 5g pH 7.3± 0.2 Agar: 15g Biên soạn: Lê Thùy Linc Page | 12 Homepage: http://lethuylinch.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phẩm Thành Phố Hồ Chí Minh Bước 2: diệt trùng cách thức và môi trường thiên nhiên đang pha. Bao gói cách thức với phân pân hận môi trường vào dụng cụ, đính thêm nút với bao gói. Hấp vô trùng ở 1210C trong 15 phút ít. Cách 3: đồng điệu mẫu mã với trộn loãng chủng loại Cân 10g chủng loại trong túi PE vô trùng, thêm 90ml dung dich SPW, đồng nhất mẫu mã sử dụng máy dập mẫu mã khoảng 30 giây. Pha loãng mẫu (xem bài xích 1, mục 1.3.2) Bước 4: Cấy mẫu vào canh MSB Chuyển 1ml dung dịch 10-1, 10-2, 10-3 vào ống 10ml canh MSB, mỗi độ đậm đặc tất cả 3 ống tái diễn, ủ nghỉ ngơi 370C, 48 giờ đồng hồ. (coi bài xích 1, mục 1.3.2). Chọn những ống (+) gồm vi sinch thiết bị phát triển làm đục môi trường nhằm triển khai phân lập khuẩn lạc đối chọi bên trên BPA Cách 5: phân lập khuẩn lạc đơn trên BPA Dùng kỹ thuật ghép ria lên dĩa thạch BPA, ủ ở 370C, 48 tiếng. Chọn trùng lạc đặc trưng :tròn lồi, Đen bóng, có quầng trong với quầng sáng xung quanh; thỉnh thoảng chỉ xuất hiện thêm 1 trong những 2 quầng (coi Hình 10: hình dạng S. aureus bên trên BPA hình 10). Chọn trùng lạc đặc trưng của S. aureus bên trên BPA để thể nghiệm sinch hóa coagulase Cách 6: thử nghiệm sinc hóa coagulase Nguim tắc: các loại ở trong kiểu như Staphylococcus có khả năng tiết ra môi trường xung quanh enzyme coagulase tất cả công dụng làm kết tụ những nhân tố của ngày tiết tương, sản xuất thành những khối hận đông làm đông máu tương. Phương pháp tiến hành: Huyết tương bạn tốt thỏ đông thô thương thơm phđộ ẩm được sử dụng đến thể nghiệm này. Cho vào ống thử 0.5ml tiết tương tín đồ giỏi thỏ ko pha loãng, bổ sung 0.5ml dịch nuôi ghép chủng thuần hoặc một lượng phệ sinh kăn năn khuẩn lạc. Xoay vơi ống nhằm trộn mọi VSV. Ủ ống thử nghiệm làm việc 370C vào 4 giờ. Quan gần kề, ghi nhấn sự dừng kết mỗi khoảng 30 phút. Tiếp tục ủ đến 24 tiếng nếu không thấy xuất hiện thêm khối kết tụ. Đọc kết quả: (+) có sự kết tụ; (-) không có sự kết tụ, các thành phần hỗn hợp vẫn đồng bộ Hình 11: xem sét coagulase. Ống bên trên (+); ống dưới (-) Biên soạn: Lê Thùy Linch Page | 13 Homepage: http://lethuylinh.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phđộ ẩm TP..Hồ Chí Minh Bài 3. Định tính Salmonella 3.1 Tóm tắt kiến thức và kỹ năng cơ bản Hình 12: Salmonella trên thạch XLD Salmonella là trực trùng gram âm, hiếu khí cùng kị khí tùy ý, có công dụng cầm tay ko tạo nên bào tử, lên men glucose cùng mannitol sinh acid tuy thế ko lên men saccharose và lactose, không sinc Indole, ko phân giải ure, không có công dụng tách đội amine từ bỏ tryptophane, số đông những chủng những sinch H2S. Salmonella có thể đối chiếu định tính bởi chiêu mộ quá trình có 4 bước: tăng sinc, tăng sinch chọn lọc, phân lập với xác minh. Salmonella thường xuyên xuất hiện trong mẫu mã cùng với con số nhỏ, bị tổn thương với thuộc hiện hữu tầm thường với một số trong những lượng lớn với những loại vi trùng không giống nằm trong bọn họ Enterobacteriaceae gồm tính đối đầu dạn dĩ cùng ức chế sự tăng trưởng của Salmonella. 3.2 Quy trình định tính Salmonella trong thực phẩm Đồng độc nhất 25g mẫu vào 225ml môi trường xung quanh tăng sinc BPW, ủ sinh hoạt 370C, 18-24 giờ đồng hồ Cấy 0.1ml dịch tăng sinh lịch sự môi trường thiên nhiên tăng sinch lựa chọn lọc RV, ủ sống 420C, 18-24 tiếng Phân lập khuẩn lạc solo bên trên tối thiểu 2 môi trường chọn lọc đặc biệt quan trọng (XLD, HE, BS, SS…), ủ sống 370C, 24 tiếng Chọn các khuẩn lạc đặc trưng mang đến Salmonella, cấy sang trọng BHI giỏi TSA, ủ qua đêm Thử nghiệm sinc hóa mang lại kết quả: - Trên KIA/TSI: đỏ/đá quý, có/ko H2S, sinh hơi/không - Urea (-); Indol (-); VP (-); LDC (+); ODC (+); Manitol (+); Sorbitol (+) Salmonella dương tính/ âm tính vào 25g chủng loại Biên soạn: Lê Thùy Linc Page | 14 Homepage: http://lethuylinh.weebly.com Trường Đại học Công nghiệp thực phđộ ẩm TP..Hồ Chí Minh 3.3 Cách tiến hành với tính hiệu quả Mẫu phân tích: cá hoặc ruột cá, khối lượng 25g cho 1 lớp Cách 1: pha môi trường xung quanh Tên môi trường thiên nhiên Thành phần Tổng thể tích Ghi crúc 1000 ml nước Phân phối hận cho từng tổ 20ml Pepton: 10g BPW đựng BPW trước khi sát trùng. (Buffered Pepton NaCl : 5g (buổi 2) Water) Na2HPO4: 3.5g pH 7.2 ± 0.2 KH2PO4: 1.5g Phân phối hận 30ml RV cho mỗi Môi ngôi trường cơ bản 1110 ml RV (Rappaport- tổ (10ml/ống nghiệm) trước Tryptone:5g pH 5.5 ± 0.2 Vassiliadis Soya Lúc khử trùng. (buổi 2) NaCl: 8g Pepton) KH2PO4: 1.6g Nước cất: 1000 ml Dung dịch MgCl2 MgCl2.6H2O: 400g Nước cất: 1000 ml Dung dịch Malachite green oxalate Malachite green oxalate: 0.4g Nước cất: 100 ml Môi ngôi trường hoàn hảo Môi ngôi trường cơ bản: 1000ml Dung dịch MgCl2: 100ml Dung dịch Malachite green oxalate: 10ml Cao nnóng men: 3g 1000 ml nước Phân phối 50ml XLD mang đến XLD đựng từng tổ (25ml/petri) (buổi 3) (Xyđại bại Lysine L-lysine: 5g Desoxycholate) Xylose: 3.75g pH 7.4 ± 0.2 Đun sôi môi Lactose: 7.5g ngôi trường. Sucrose: 7.5g Biên soạn: Lê Thùy Linh Page | 15 Homepage: http://lethuylinc.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phđộ ẩm TP..Hồ Chí Minh hấp. Sodium deoxycholate: Không giữ 2.5g Không Ferric ammonium thừa 1 ngày citrate: 0.8g Sodium thiosulfate: 6.8g NaCl: 5g Agar:15g Phenol red: 0.08g 1000 ml nước Phân phối hận 50ml HE cho từng Proteose Peptone: 12.0g HE chứa tổ (25ml/petri) (buổi 3) (Hektoen Entric Yeast Extract: 3.0g Agar) Bile Salts No. 3: 9.0g pH 7.5± 0.2 Đun sôi môi Lactose: 12.0g ngôi trường. Saccharose: 12.0g Không hấp. Salicin: 2.0g Sodium Chloride: 5.0g Sodium Thiosulfate: 5.0g Ferric Ammonium Citrate : 1.5g Agar: 14.0g Bromthymol Blue: 65.0mg Acid Fuchsin : 0.1g 1000 ml nước Phân păn năn 50ml TSA mang lại Trypticase peptone: 15g TSA cất mỗi tổ (25ml/petri) (buổi 4) (Tryptone Soya Phytone peptone: 5g Agar) NaCl: 5g pH 7.3± 0.2 Agar: 15g 1000 ml nước Phân phối 20ml KIA mang đến Polypeptone peptone: KIA đựng từng tổ (10ml/ống nghiệm) (Kliger Iron 20g (buổi 5) Agar) Lactose: 20g pH 7.4± 0.2 Dextrose: 1g NaCl: 5g Biên soạn: Lê Thùy Linc Page | 16 Homepage: http://lethuylinc.weebly.com Trường Đại học Công nghiệp thực phẩm TPhường.Hồ Chí Minh Ferric ammonium citrate: 0.5g Sodium thiosulfate: 0.5g Agar: 15g Phenol red: 0.025g 1000ml nước Mỗi tổ chỉ cần sử dụng 40ml, phân Both Môi trường 1: MR-VP.. cất. phối 10ml/ống thử. (Glucose Buffered peptone-water Kiểm tra lại môi trường cung Phosphate) powder: 7g pH 6.9 ± 0.2 cung cấp nào để pha môi trường. Glucose: 5g (buổi 5) K2HPO4: 5g Môi ngôi trường 2: Casein Pancreatic Digest: 3.5g Peptic digest of animal tissue:3.5g Dextrose: 5g Potassium phosphate: 5g pH 6.9 ± 0.2 Môi trường 3: Peptone: 5g Glucose: 5g Phosphate buffer: 5g pH 7.5 ± 0.2 1000ml nước Mỗi tổ chỉ cần sử dụng 30ml, phân Dipotassium Phosphate: RSU cất. pân hận 3ml/ống nghiệm. (Rustigian-Stuart 9.5g (buổi 5) Urea Broth) Yeast Extract: 0.1g pH 6.8 ± 0.2 Urea: 20g Monopotassium Phosphate: 9.1g Phenol Red: 0.01g Biên soạn: Lê Thùy Linh Page | 17 Homepage: http://lethuylinch.weebly.com Trường Đại học tập Công nghiệp thực phđộ ẩm TP.HCM Cách 2: vô trùng công cụ cùng môi trường xung quanh sẽ trộn. Bao gói chế độ và phân phối hận môi trường thiên nhiên vào vẻ ngoài, thêm nút ít cùng bao gói. Hấp sát trùng ở 1210C vào 15 phút. Cách 4: Tăng sinc Đối cùng với các các loại chủng loại thông thường triển khai cân 25g mẫu mã vào túi PE vô trùng, bổ sung cập nhật 225ml dung dịch BPW và đồng nhất chủng loại bởi Stomacher vào 15 hoặc 30 giây. Ủ ngơi nghỉ 370C, 18-24 tiếng. Đối với một số trong những các loại thực phđộ ẩm (mẫu mã gia nạm tươi sống, sữa khô, những các gia vị tuyệt các loại thực phẩm chứa nhiều các gia vị, casein, pho non, bơ, thành phầm đựng cocoa, những thành phầm của dừa) bao gồm đựng những chất rất có thể khiến độc hoặc khắc chế sự lớn mạnh của Salmonella phải thực hiện các bước tăng sinh đặc trưng (xem TLTK). Bước 5: Tăng sinc chọn lọc Lắc để trộn những dịch tăng sinh, cùng gửi 0.1ml sang trọng 10ml môi trường xung quanh tăng sinh RV đã làm được ủ ấm 420C. Ủ sinh hoạt 420C, 18-24 tiếng. Lúc quan trọng có thể kéo dài thời gian ủ thêm 24 tiếng. Cách 6: Phân lập với nhấn diện Dùng que cấy vòng tiến hành kỹ thuật ghép phân lập khuẩn lạc 1-1 với như là tự dịch tăng sinch chọn lọc ra dĩa môi trường xung quanh tinh lọc biệt lập đặc trưng đến Salmonella như XLD cùng HE. Biểu hiện nay của Salmonella trên từng môi trường nlỗi sau: + Môi ngôi trường XLD: trùng lạc gồm màu hồng trong veo, tất cả hay không có vai trung phong Black. Một số dòng Salmonella hoàn toàn có thể có trung khu black láng không hề nhỏ hoàn toàn có thể chiếm khoảng hết trùng lạc. Hình 13: trùng lạc Salmonella bên trên XLD Hình 14: trùng lạc Salmonella bên trên HE + Môi trường HE: trùng lạc Salmonella tất cả màu biến đổi từ xanh dương đến blue color lục, có hay không gồm vai trung phong black. Một số dòng Salmonella rất có thể có trung ương đen nhẵn không hề nhỏ hoàn toàn có thể chiếm gần hết trùng lạc. Bước 7: Khẳng định Từ mỗi môi trường chọn lọc khác nhau chọn với ghép chuyền ít nhất 5 khuẩn lạc nghi vấn sang trọng môi trường thiên nhiên không chọn lọc TSA. Ủ nghỉ ngơi 370C, 18-24 giờ đồng hồ. Các trùng lạc xuất hiện thêm trên môi trường này được thực hiện cho những xem sét sinc hóa nhỏng sau: Biên soạn: Lê Thùy Linch Page | 18 Homepage: http://lethuylinc.weebly.com

Chuyên mục: Phần Mềm